技術文章
TECHNICAL ARTICLES原代細胞實驗器具清洗l玻璃類1、主要有:培養瓶,血清瓶,小青瓶,移液管,離心管,試管,培養皿等。2、清洗步驟:泡在含有洗潔凈的自來水中→撈出來用毛刷將實驗器具各個面刷洗至少25遍→自來水沖洗25遍→過一遍一蒸水→泡入鉻酸,過夜(24h左右)→從鉻酸中撈出器具,自來水沖洗25遍→過三遍一蒸水,三遍三蒸水→烘箱內烘干→收入柜子備用→用前高溫滅菌(121℃,25min)→烘干→使用。注意:新的玻璃器具先要泡鹽酸1天,然后清洗步驟與上面相同。l塑料類1塑料類器具主要包括:孔板,大槍頭...
影響哺乳動物原代細胞復蘇的因素包括:(a)細胞類型,(b)生長階段,(c)細胞處于細胞周期的哪個階段,(d)終懸液中的細胞數量和濃度。可通過優化以上因素來提高復蘇細胞活力,另外,還需考慮凍存保護劑的特性以及凍存過程的具體操作。哺乳動物細胞培養對其他細胞和微生物的污染特別敏感,例如Hela細胞。由于這種特性,初始細胞系可通過同工酶分析、染色體組型分析、免疫分析或基因組分析,檢測來源。凍存前后均應該進行如上檢測。特別需要注意的是,病毒和支原體污染。一套完整健全的哺乳動物細胞系鑒定...
(一)細胞系選材常用胚胎動物或新生鼠神經組織。雞胚常用胚齡6-8d,新生鼠或胎鼠(12-14d)或人胚胎。不過也有認為與組織相關。如大白鼠胚胎以19d為宜,小鼠以18d為宜,大鼠紋狀體以10d為宜;若紋狀體與黑質聯合培養的大鼠胚,則黑質以13d,紋狀體18-21d為宜;小腦以20-21d小鼠胚胎,所獲蒲氏細胞成活率高,顆粒細胞正在分化;脊髓與DRG聯合培養,常用4-7d雞胚或12-14d小鼠胚胎,取材易,神經成活率高。(二)取材。腦則取出相應組織,在解剖液中先剪碎,以使胰酶消...
巨核細胞株雖然在骨髓的造血細胞中為數zui少,僅占骨髓有核細胞總數的0.05%,但其產生的血小板卻對機體的止血功能極為重要。每個巨核細胞均可產生1000-6000個血小板。生成血小板的巨核細胞也是從骨髓中的造血干細胞分化發展來的。造血干細胞首先分化生成巨核系祖細胞,也稱巨核系集落形成單位(colonyformingunit-megakaryocyte,CFU-Meg)。祖細胞階段的細胞核內的染色體一般是2-3倍體。當祖細胞是2倍體或4倍體時,細胞具有增殖能力,因此這是巨核細胞...
(一)原代細胞操作步驟1.用頸椎脫位的方法處死小白鼠后,迅速剖開腹部取出肝臟,剪成小塊(去除結締組織)盡快置于盛有0.9%NaCl的燒杯中,反復洗滌,盡量除去血污,用濾紙吸去表面的液體。2.將濕重約1g的肝組織放在小平皿中,用量筒量取8ml預冷的0.25mol/L蔗糖一0.003mol/L氯化鈣溶液,先加少量該溶液于平皿中,盡量剪碎肝組織后,再全部加入。3.剪碎的肝組織倒入勻漿管中,使勻漿器下端浸入盛有冰塊的器皿中,左手持之,右手將勻漿搗桿垂直插入管中,上下轉動研磨3~5次,...
1.細胞系實驗室凍存盒平時放4度,需要凍細胞時直接拿出來用就可以了。第二天轉移至液氮,貴重的細胞盡快轉移,不然會影響復蘇成活率的。一般是用5次就更換一下異丙醇。現在也有一些商品化凍存液可以直接丟進-80的,很方便,效果也不錯的。2.異丙醇的量是要保證的,不能低于表明的線,否則不能起到很好的程序性降溫作用,我們是在4度放置,放了細胞后立馬放到-80度冰箱,第二天再轉移到液氮,效果很不錯。異丙醇熔點:-87.9度的色透明具有乙醇氣味的可燃性有毒液體。注意了有可燃性!急性毒性:口服...
①原代細胞浸泡:新購進的玻璃器皿常帶有灰塵,呈弱堿性,或帶有鉛、碑等有害物質,故先用自來水浸泡、水洗,然后再用2%~5%鹽酸浸泡或煮沸30min,水洗。要領:培養用后的玻璃器皿要立即泡入清水中,使下道刷洗工作能順利進行。用后的玻璃器皿常帶有大量的蛋白質附著,干涸后不易刷洗掉,用后要立即用清水浸泡。②刷洗:用軟毛刷、洗滌劑,刷去器皿上的雜質,沖洗晾干。要領:浸泡后的玻璃器皿用毛刷沾洗滌劑去器皿上的雜質、刷洗次太多,會損害器皿的表面光潔度,洗滌劑有使pH上升的趨勢,所以易選用軟毛...
原代細胞線粒體在細胞凋亡的過程中起著樞紐作用,多種細胞凋亡刺激因子均可誘導不同的細胞發生凋亡,而線粒體跨膜電位的下降,被認為是細胞凋亡級聯反應過程中zui早發生的事件,它發生在細胞核凋亡特征(染色質濃縮、DNA斷裂)出現之前,一旦線粒體DYmt崩潰,則細胞凋亡不可逆轉。線粒體跨膜電位的存在,使一些親脂性陽離子熒光染料如Rhodamine123、3,3-Dihexyloxacarbocyanineiodide[DiOC6(3)]、Tetrechloro-tetraethylbe...
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