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過氧化物酶標記測定法原理

腫瘤細胞原理：脫氧核糖核苷酸衍生物地高辛[(digoxigenin)-11-dUTP]在TdT酶的作用下,可以摻入到凋亡細胞雙鏈或單鏈DNA的3-OH末端,與dATP形成異多聚體,并可與連接了報告酶(過氧化物酶或堿性磷酸酶)的抗地高辛抗體結合.在適合底物存在下,過氧化物酶可產生很強的顏色反應,特異準確的定位出正在凋亡的細胞,因而可在普通光學顯微鏡下進行觀察.毛地黃植物是地高辛的*來源.在所有動物組織中幾乎不存在能與抗地高辛杭體結合的配體,因而非特異性反應很低.抗地高辛的特異性...

新生小鼠頸上交感神經元分散細胞培養

原代細胞交感神經系統在維持機體的正常功能和對環境的適應性反應中起著十分重要的作用。交感神經細胞培養特別有助于神經細胞發育和可塑性研究，利用體外培養系統可進行交感神經細胞的發生、死亡、形態和生化發育、遞質表形的獲得，以及靶組織與傳入纖維的突觸形成的研究。此外，通過體外培養系統可獲得關于神經營養因子、激素，細胞因子等調節交感神經元發育的信息，了解傳入纖維的輸入以及與靶組織的的機制。1、材料和方法實驗用出生當天的昆明種小鼠，在無菌條件下腹部朝上固定于塑料泡沫板上,用微解剖鑷在解剖顯...

常見的細胞因子受體檢測的方法介紹

（一）活細胞系吸收試驗原理將過量的待測細胞與*細胞因子共孵育，若細胞膜表面存在相應的細胞因子受體即可結合細胞因子，通過測定前、后細胞因子生物活性的對比情況可推測待測細胞表面細胞因子受體是否存在。方法1．過量的待測細胞、適量細胞因子準備。2．共孵育，時間根據待測細胞和細胞因子選擇。可設2h,4h,6h,8h和更長時間。3．離心（1500r/min,5分鐘）收集上清液。4．測定孵育前后的細胞因子活性。方法同細胞因子測定。注意事項此法簡便，適用于定性，但不適用于定量檢測。（二）核素...

原代細胞計數的操作步驟

（一）原代細胞計數1、將血球計數板及蓋片用擦試干凈，并將蓋片蓋在計數板上。2、將細胞懸液吸出少許，滴加在蓋片邊緣，使懸液充滿蓋片和計數板之間。3、靜置3分鐘。4、鏡下觀察，計算計數板四大格細胞總數，壓線細胞只計左側和上方的。然后按下式計算：細胞數/ml＝4大格細胞總數/4×10000注意：鏡下偶見由兩個以上細胞組成的細胞團，應按單個細胞計算，若細胞團占10%以上，說明分散不好，需重新制備細胞懸液。（二）原代細胞活力1、將細胞懸液以0.5ml加入試管中。2、加入0.5ml0.4...

從原培養容器中分離細胞操作流程

細胞系從基層迅速分離細胞，且保持細胞完整性的一般步驟。這一步驟并不意味著對于所有細胞系的廣泛應用，每一種系統*條件和施用濃度應該根據經驗加以確定。再次培養時檢測細胞的活性。細胞的活率應該超過90%對于無血清培養基，降低胰蛋白酶使用量。1.移棄使用過的細胞培養基。2.使用不包含有鈣鎂的平衡鹽溶液或EDTA(ethylenediaminetetraaceticacid，乙二胺四乙酸.)清洗細胞系(看表確定正確的清洗溶液)。在培養瓶對著細胞的一面加入清洗溶液，通過轉動培養瓶1到2分...

成纖維細胞排除法操作流程

1.原代細胞機械刮除法：是用不銹鋼絲末端插有橡膠刮頭(用膠塞剪成三角形插以不銹鋼絲)、或裹少許脫脂棉制成，裝入試管中高壓滅菌后備用(也可用特制電熱燒灼器刮除)。刮除程序為：(1)標記：鏡下觀察，用不脫色筆在培養瓶皿的背面圈下生長腫瘤細胞的部位;(2)刮除：棄掉培養液，把無菌膠刮伸入瓶皿中，肉眼或顯微鏡窺視下，刮除無標記空間;(3)用Hanks液沖洗一兩次，洗除被刮掉的細胞;(4)注入培養液繼續培養，如發現仍有成纖維細胞殘留，可重復刮除至*除掉為止2.反復貼壁法：根據腫瘤細胞比...

對淋巴細胞系進行體外刺激預孵育、或板內同步刺激培養

1、將抗原和淋巴細胞系在體外混合，刺激并預孵育，是通用的方法。預孵育的淋巴細胞，在置入ELISPOT板之前應使用復溫到37℃的培養液清洗細胞1-2次。置入ELISPOT板以后通常在37℃培養5～6小時。2、對于高度特異性抗原，可以采用將淋巴細胞和抗原同時加入ELISPOT板孔中，37℃培養箱中，同步進行刺激、培養、和細胞因子捕獲。淋巴細胞板內同步刺激培養的時間通常為22～24小時。3、ELISPOT試驗檢測的是每一個分泌細胞系因子的活化細胞。在培養細胞過程中，任何移動、震動（...

細胞電穿孔轉染操作步驟

原代細胞對于細胞轉染而言，目前主要是轉染試劑(多為脂質體)的天下。磷酸鈣轉染的方法雖說有些out，但有些細胞還就認準這一套。不過，對于某些淋巴細胞而言，化學方法怎么都不奏效，那我們只能采取強硬手段，用電穿孔的方法進行轉染。應用電穿孔時，一般都選擇恒定的電容，然后在不同的場強下轟擊細胞，以摸索*實驗條件。就大多數細胞而言，在電穿孔后能有20-50%的細胞存活率就OK，足以保證DNA的成功轉染。電穿孔通常在室溫下進行，之后將細胞置于冰上，以延長原代細胞膜孔道開放的時間。與傳統的磷...