商品屬性：

產(chǎn)品信息：

產(chǎn)品名稱 人心肌成纖維細(xì)胞

組織來源 心臟組織

產(chǎn)品規(guī)格 5×10^5Cells/T25

細(xì)胞簡(jiǎn)介 人心肌成纖維細(xì)胞分離自心臟組織；心臟由心肌細(xì)胞和非心肌細(xì)胞組成，非心肌細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù)量的約70%，其中約90%以上的非心肌細(xì)胞由心肌成纖維細(xì)胞組成，在不同物種（如小鼠、大鼠和人類）中可能略有差異。“成纖維細(xì)胞" 指一類存在于間質(zhì)中的異質(zhì)性高遷移基質(zhì)細(xì)胞，其功能和表型具有組織特異性。在心臟中，心臟成纖維細(xì)胞負(fù)責(zé)維持組織穩(wěn)態(tài)并調(diào)控細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）的更新。目前尚無特異性的心臟成纖維細(xì)胞分子標(biāo)志物，但這類細(xì)胞通常表達(dá)轉(zhuǎn)錄因子 21（TCF21）、波形蛋白（vimentin）及 CD90（或 Thy-1）。心肌成纖維細(xì)胞在生物學(xué)特性上與肝星狀細(xì)胞存在顯著共性，二者均以“靜息-激活"的功能狀態(tài)轉(zhuǎn)換為核心特征，且狀態(tài)轉(zhuǎn)換緊密關(guān)聯(lián)細(xì)胞的增殖活性與功能實(shí)現(xiàn)。當(dāng)受到應(yīng)激或損傷時(shí)，成纖維細(xì)胞會(huì)失去正常表型并活化成為肌成纖維細(xì)胞。靜息心肌成纖維細(xì)胞的細(xì)胞骨架中不含 α- 平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）。與靜息成纖維細(xì)胞不同，肌成纖維細(xì)胞收縮能力強(qiáng)，其細(xì)胞骨架排列特殊，含有α-SMA陽(yáng)性應(yīng)力纖維 、成熟黏著斑，并會(huì)增加骨膜蛋白（periostin）和纖維狀膠原蛋白的合成。有研究表明，在模擬天然組織特性的彈性表面培養(yǎng)原代成纖維細(xì)胞有助于減輕肌成纖維細(xì)胞的活化。對(duì)于心肌組織而言，彈性模量（E）約為7 kPa的培養(yǎng)表面模擬健康組織，而E>10 kPa的表面則被視為纖維化組織。這構(gòu)成了一個(gè)顯著挑戰(zhàn)，因?yàn)閭鹘y(tǒng)聚苯乙烯組織培養(yǎng)板的硬度要高得多，通常可達(dá)E=3 GPa。此外，雖然傳代原代細(xì)胞以提高培養(yǎng)群體均一性是常規(guī)操作，但傳代會(huì)進(jìn)一步驅(qū)動(dòng)肌成纖維細(xì)胞活化。原代心肌成纖維細(xì)胞在傳統(tǒng)細(xì)胞培養(yǎng)中接種數(shù)小時(shí)內(nèi)就會(huì)自發(fā)呈現(xiàn)促纖維化的活化肌成纖維細(xì)胞表型。有研究表明，在低營(yíng)養(yǎng)、低血清、細(xì)胞接種在低生物力學(xué)刺激的彈性基質(zhì)（而非堅(jiān)硬塑料）上，可使未傳代（P0）原代心肌成纖維細(xì)胞在體外維持超過72小時(shí)，且不會(huì)顯著活化肌成纖維細(xì)胞表型，但其維持效果仍然有限。實(shí)驗(yàn)室分離的心肌成纖維細(xì)胞，經(jīng)實(shí)驗(yàn)測(cè)試，剛分離后即立刻接種在培養(yǎng)板/爬片，培養(yǎng)24 h約70-90%占比細(xì)胞表達(dá)Vimentin處于靜息態(tài)（其他處于激活態(tài)），培養(yǎng)48 h約>70%轉(zhuǎn)變?yōu)榧せ顟B(tài)，α-SMA表達(dá)上升。傳代操作后大部分處于激活態(tài)。該細(xì)胞鑒定為接種24 h內(nèi)靜息態(tài)時(shí)刻鑒定（Vimentin/α-SMA），細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)、運(yùn)輸后已處于激活態(tài)。

方法簡(jiǎn)介 實(shí)驗(yàn)室分離的人心肌成纖維細(xì)胞采用膠原酶-聯(lián)合消化結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10? cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)室分離的人心肌成纖維細(xì)胞經(jīng)Vimentin/α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

自備試劑： 0.25%  、PBS  、培養(yǎng)基

培養(yǎng)基： 人心肌成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基(含F(xiàn)BS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性： 貼壁

細(xì)胞形態(tài)： 成纖維細(xì)胞樣

傳代比例： 1:2

傳代特性： 可傳3-5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液：0.25%

原代細(xì)胞培養(yǎng)步驟：

取材與預(yù)處理?：取新生24小時(shí)內(nèi)Wistar大鼠，麻醉后無菌取出肺組織，PBS沖洗去除血管和氣管?。

?消化?：剪碎肺組織，依次用0.2%膠原酶（37℃震蕩1h）和0.5%酶（消化30min）消化，終止后過濾?。

?純化?：采用IgG吸附法去除未貼壁細(xì)胞，離心后重懸接種?。

?培養(yǎng)?：使用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基，37℃、5% CO?培養(yǎng)，24小時(shí)后換液?。

培養(yǎng)方法?：

原代細(xì)胞培養(yǎng)?

?材料?：新生大鼠肺組織、0.2%膠原酶、0.5%酶、DMEM培養(yǎng)基（含10%胎牛血清）。

?步驟?：

取出肺組織，PBS沖洗去除血管和氣管，剪碎。

依次用膠原酶（37℃震蕩1h）和酶（消化30min）消化，終止后過濾。

通過IgG吸附法去除未貼壁細(xì)胞，離心后接種于培養(yǎng)皿。

37℃、5% CO?培養(yǎng)，24小時(shí)后換液。

?注意事項(xiàng)?：消化時(shí)間需嚴(yán)格控制（胎鼠25分鐘，新生鼠40-60分鐘），避免過度消化導(dǎo)致細(xì)胞死亡。

?細(xì)胞系培養(yǎng)?

?傳代?：0.25%消化1-2分鐘，加入含血清培養(yǎng)基終止，按1:2-1:4比例傳代。

?條件?：DMEM+10%胎牛血清，每周換液2-3次，37℃、5% CO?培養(yǎng)。

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