商品屬性：

產品信息：

產品名稱 人心肌成纖維細胞

組織來源 心臟組織

產品規格 5×10^5Cells/T25

細胞簡介 人心肌成纖維細胞分離自心臟組織；心臟由心肌細胞和非心肌細胞組成，非心肌細胞占細胞總數量的約70%，其中約90%以上的非心肌細胞由心肌成纖維細胞組成，在不同物種（如小鼠、大鼠和人類）中可能略有差異。“成纖維細胞" 指一類存在于間質中的異質性高遷移基質細胞，其功能和表型具有組織特異性。在心臟中，心臟成纖維細胞負責維持組織穩態并調控細胞外基質（ECM）的更新。目前尚無特異性的心臟成纖維細胞分子標志物，但這類細胞通常表達轉錄因子 21（TCF21）、波形蛋白（vimentin）及 CD90（或 Thy-1）。心肌成纖維細胞在生物學特性上與肝星狀細胞存在顯著共性，二者均以“靜息-激活"的功能狀態轉換為核心特征，且狀態轉換緊密關聯細胞的增殖活性與功能實現。當受到應激或損傷時，成纖維細胞會失去正常表型并活化成為肌成纖維細胞。靜息心肌成纖維細胞的細胞骨架中不含 α- 平滑肌肌動蛋白（α-SMA）。與靜息成纖維細胞不同，肌成纖維細胞收縮能力強，其細胞骨架排列特殊，含有α-SMA陽性應力纖維 、成熟黏著斑，并會增加骨膜蛋白（periostin）和纖維狀膠原蛋白的合成。有研究表明，在模擬天然組織特性的彈性表面培養原代成纖維細胞有助于減輕肌成纖維細胞的活化。對于心肌組織而言，彈性模量（E）約為7 kPa的培養表面模擬健康組織，而E>10 kPa的表面則被視為纖維化組織。這構成了一個顯著挑戰，因為傳統聚苯乙烯組織培養板的硬度要高得多，通常可達E=3 GPa。此外，雖然傳代原代細胞以提高培養群體均一性是常規操作，但傳代會進一步驅動肌成纖維細胞活化。原代心肌成纖維細胞在傳統細胞培養中接種數小時內就會自發呈現促纖維化的活化肌成纖維細胞表型。有研究表明，在低營養、低血清、細胞接種在低生物力學刺激的彈性基質（而非堅硬塑料）上，可使未傳代（P0）原代心肌成纖維細胞在體外維持超過72小時，且不會顯著活化肌成纖維細胞表型，但其維持效果仍然有限。實驗室分離的心肌成纖維細胞，經實驗測試，剛分離后即立刻接種在培養板/爬片，培養24 h約70-90%占比細胞表達Vimentin處于靜息態（其他處于激活態），培養48 h約>70%轉變為激活態，α-SMA表達上升。傳代操作后大部分處于激活態。該細胞鑒定為接種24 h內靜息態時刻鑒定（Vimentin/α-SMA），細胞經培養、運輸后已處于激活態。

方法簡介 實驗室分離的人心肌成纖維細胞采用膠原酶-聯合消化結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10? cells/瓶。

質量檢測 實驗室分離的人心肌成纖維細胞經Vimentin/α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養信息：

自備試劑： 0.25%  、PBS  、培養基

培養基： 人心肌成纖維細胞培養基(含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液一次

生長特性： 貼壁

細胞形態： 成纖維細胞樣

傳代比例： 1:2

傳代特性： 可傳3-5代左右；3代以內狀態佳

消化液：0.25%

原代細胞培養步驟：

取材與預處理?：取新生24小時內Wistar大鼠，麻醉后無菌取出肺組織，PBS沖洗去除血管和氣管?。

?消化?：剪碎肺組織，依次用0.2%膠原酶（37℃震蕩1h）和0.5%酶（消化30min）消化，終止后過濾?。

?純化?：采用IgG吸附法去除未貼壁細胞，離心后重懸接種?。

?培養?：使用含10%胎牛血清的DMEM培養基，37℃、5% CO?培養，24小時后換液?。

培養方法?：

原代細胞培養?

?材料?：新生大鼠肺組織、0.2%膠原酶、0.5%酶、DMEM培養基（含10%胎牛血清）。

?步驟?：

取出肺組織，PBS沖洗去除血管和氣管，剪碎。

依次用膠原酶（37℃震蕩1h）和酶（消化30min）消化，終止后過濾。

通過IgG吸附法去除未貼壁細胞，離心后接種于培養皿。

37℃、5% CO?培養，24小時后換液。

?注意事項?：消化時間需嚴格控制（胎鼠25分鐘，新生鼠40-60分鐘），避免過度消化導致細胞死亡。

?細胞系培養?

?傳代?：0.25%消化1-2分鐘，加入含血清培養基終止，按1:2-1:4比例傳代。

?條件?：DMEM+10%胎牛血清，每周換液2-3次，37℃、5% CO?培養。

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