商品屬性：

產品信息：

產品名稱 小鼠血管外膜成纖細胞

簡稱 VAFs

組織來源 血管組織

產品規(guī)格 5×10^5Cells/T25

細胞簡介 小鼠血管外膜成纖細胞分離自血管外膜組織；血管外膜是由疏松結締組織組成，其中含螺旋狀或縱向分布的彈性纖和膠原纖。血管壁的結締組織細胞以成纖細胞為主，當血管受損傷時，成纖細胞具有修復外膜的能力。有的動脈中膜和外膜的交界處，有密集的彈性纖組成的外彈性膜。成纖細胞（Fibroblast）是疏松結締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質細胞分化而來。成纖細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖細胞功能活動旺盛，細胞質嗜弱堿性，具明顯的蛋白質合成和分泌活動，在定條件下，它可以實現(xiàn)跟纖細胞的互相轉化；成纖細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的血管外膜成纖細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30 min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6 h后細胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。血管外膜成纖細胞是血管外膜的主要組成細胞之，其主要生理功能合成和釋放細胞外基質以及組織損傷后及時大量聚集修復損傷組織。

方法簡介 實驗室分離的小鼠血管外膜成纖細胞采用-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10? cells/瓶。

質量檢測 實驗室分離的小鼠血管外膜成纖細胞經Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

自備試劑： 0.25% 、PBS 、培養(yǎng)基

培養(yǎng)基： 小鼠血管外膜成纖細胞培養(yǎng)基(含F(xiàn)BS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液次

生長特性： 貼壁

細胞形態(tài)： 成纖細胞樣

傳代比例： 1:2

傳代特性： 可傳3代左右

消化液： 0.25%

原代細胞培養(yǎng)步驟：

取材與預處理?：取新生24小時內Wistar大鼠，麻醉后無菌取出肺組織，PBS沖洗去除血管和氣管?。

?消化?：剪碎肺組織，依次用0.2%膠原酶（37℃震蕩1h）和0.5%酶（消化30min）消化，終止后過濾?。

?純化?：采用IgG吸附法去除未貼壁細胞，離心后重懸接種?。

?培養(yǎng)?：使用含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基，37℃、5% CO?培養(yǎng)，24小時后換液?。

培養(yǎng)方法?：

原代細胞培養(yǎng)?

?材料?：新生大鼠肺組織、0.2%膠原酶、0.5%酶、DMEM培養(yǎng)基（含10%胎牛血清）。

?步驟?：

取出肺組織，PBS沖洗去除血管和氣管，剪碎。

依次用膠原酶（37℃震蕩1h）和酶（消化30min）消化，終止后過濾。

通過IgG吸附法去除未貼壁細胞，離心后接種于培養(yǎng)皿。

37℃、5% CO?培養(yǎng)，24小時后換液。

?注意事項?：消化時間需嚴格控制（胎鼠25分鐘，新生鼠40-60分鐘），避免過度消化導致細胞死亡。

?細胞系培養(yǎng)?

?傳代?：0.25%消化1-2分鐘，加入含血清培養(yǎng)基終止，按1:2-1:4比例傳代。

?條件?：DMEM+10%胎牛血清，每周換液2-3次，37℃、5% CO?培養(yǎng)。

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