細(xì)胞簡(jiǎn)介：

產(chǎn)品名稱 兔心肌成纖細(xì)胞

組織來(lái)源 心臟組織

產(chǎn)品規(guī)格 5×10^5Cells/T25

細(xì)胞簡(jiǎn)介 兔心肌成纖細(xì)胞分離自心臟組織；心臟由心肌細(xì)胞和非心肌細(xì)胞組成，非心肌細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù)量的約70%，其中約90%以上的非心肌細(xì)胞由心肌成纖細(xì)胞組成，在不同物種（如小鼠、大鼠和人類）中可能略有差異?！俺衫w細(xì)胞" 指類存在于間質(zhì)中的異質(zhì)性高遷移基質(zhì)細(xì)胞，其功能和表型具有組織特異性。在心臟中，心臟成纖細(xì)胞負(fù)責(zé)持組織穩(wěn)態(tài)并調(diào)控細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）的更新。目前尚無(wú)特異性的心臟成纖細(xì)胞分子標(biāo)志物，但這類細(xì)胞通常表達(dá)轉(zhuǎn)錄因子 21（TCF21）、波形蛋白（vimentin）及 CD90（或 Thy-1）。心肌成纖細(xì)胞在生物學(xué)特性上與肝星狀細(xì)胞存在顯著共性，二者均以“靜息-激活"的功能狀態(tài)轉(zhuǎn)換為核心特征，且狀態(tài)轉(zhuǎn)換緊密關(guān)聯(lián)細(xì)胞的增殖活性與功能實(shí)現(xiàn)。當(dāng)受到應(yīng)激或損傷時(shí)，成纖細(xì)胞會(huì)失去正常表型并活化成為肌成纖細(xì)胞。靜息心肌成纖細(xì)胞的細(xì)胞骨架中不含 α- 平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-SMA）。與靜息成纖細(xì)胞不同，肌成纖細(xì)胞收縮能力強(qiáng)，其細(xì)胞骨架排列特殊，含有α-SMA陽(yáng)性應(yīng)力纖 、成熟黏著斑，并會(huì)增加骨膜蛋白（periostin）和纖狀膠原蛋白的合成。有研究表明，在模擬天然組織特性的彈性表面培養(yǎng)原代成纖細(xì)胞有助于減輕肌成纖細(xì)胞的活化。對(duì)于心肌組織而言，彈性模量（E）約為7 kPa的培養(yǎng)表面模擬健康組織，而E>10 kPa的表面則被視為纖化組織。這構(gòu)成了個(gè)顯著挑戰(zhàn)，因?yàn)閭鹘y(tǒng)聚苯乙烯組織培養(yǎng)板的硬度要高得多，通?？蛇_(dá)E=3 GPa。此外，雖然傳代原代細(xì)胞以提高培養(yǎng)群體均性是常規(guī)操作，但傳代會(huì)進(jìn)步驅(qū)動(dòng)肌成纖細(xì)胞活化。原代心肌成纖細(xì)胞在傳統(tǒng)細(xì)胞培養(yǎng)中接種數(shù)小時(shí)內(nèi)就會(huì)自發(fā)呈現(xiàn)促纖化的活化肌成纖細(xì)胞表型。有研究表明，在低營(yíng)養(yǎng)、低血清、細(xì)胞接種在低生物力學(xué)刺激的彈性基質(zhì)（而非堅(jiān)硬塑料）上，可使未傳代（P0）原代心肌成纖細(xì)胞在體外持超過(guò)72小時(shí)，且不會(huì)顯著活化肌成纖細(xì)胞表型，但其持效果仍然有限。實(shí)驗(yàn)室分離的心肌成纖細(xì)胞，經(jīng)實(shí)驗(yàn)測(cè)試，剛分離后即立刻接種在培養(yǎng)板/爬片，培養(yǎng)24 h約70-90%占比細(xì)胞表達(dá)Vimentin處于靜息態(tài)（其他處于激活態(tài)），培養(yǎng)48 h約>70%轉(zhuǎn)變?yōu)榧せ顟B(tài)，α-SMA表達(dá)上升。傳代操作后大部分處于激活態(tài)。該細(xì)胞鑒定為接種24 h內(nèi)靜息態(tài)時(shí)刻鑒定（Vimentin/α-SMA），細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)、運(yùn)輸后已處于激活態(tài)。

方法簡(jiǎn)介 實(shí)驗(yàn)室分離的兔心肌成纖細(xì)胞采用膠原酶-聯(lián)合消化結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10? cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)室分離的兔心肌成纖細(xì)胞經(jīng)Vimentin/α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

產(chǎn)品信息：

培養(yǎng)信息：

自備試劑： 0.25% 、PBS 、培養(yǎng)基

培養(yǎng)基： 兔心肌成纖細(xì)胞 培養(yǎng)基(基礎(chǔ)培養(yǎng)基，含F(xiàn)BS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液次

生長(zhǎng)特性： 貼壁

細(xì)胞形態(tài)： 成纖細(xì)胞樣

傳代比例： 1:2

傳代特性： 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液： 0.25%

凍存步驟：

凍存前準(zhǔn)備?

確保細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，密度達(dá)80%-90%?。

配制凍存液：推薦50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+10%DMSO?。

?細(xì)胞處理?

棄去培養(yǎng)上清，用PBS潤(rùn)洗1-2次?。

加入消化后，用含血清的培養(yǎng)基終止消化。

?凍存操作?

離心（1000RPM，3-4分鐘）后棄上清，用凍存液重懸細(xì)胞?。

分裝至凍存管（每管1mL，細(xì)胞數(shù)100-400萬(wàn)）?。

4℃靜置10分鐘，-20℃ 2小時(shí)，-80℃過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮?。

公司正在出售的產(chǎn)品：

操作實(shí)驗(yàn)步驟：

1. 原代細(xì)胞分離

?組織獲取?：采用成年SD大鼠，快速取出海馬或脊髓組織，置于低溫人工腦脊液（0-4℃）中保存?。

?消化與離心?：使用木瓜蛋白酶消化組織，通過(guò)Optiprep不連續(xù)梯度離心，收集組織細(xì)胞密集帶?。

?細(xì)胞培養(yǎng)?：將細(xì)胞懸液接種于含B27添加劑和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子2（FGF-2）的培養(yǎng)基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培養(yǎng)?。

2. 細(xì)胞純化

?差速貼壁法?：通過(guò)搖床分離（200r/min去除小膠質(zhì)細(xì)胞，280r/min收集少突前體細(xì)胞）?。

?免疫磁珠分選?：利用NG2抗體標(biāo)記后通過(guò)磁珠分選，提高純度?。

3. 細(xì)胞傳代與凍存

?傳代?：使用含EDTA和DNase I的消化液處理細(xì)胞，按1:3比例傳代?。

?凍存?：將細(xì)胞重懸于凍存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降溫后保存于液氮中?。

4. 功能驗(yàn)證

?免疫熒光染色?：檢測(cè)NG2、GFAP等標(biāo)志物表達(dá)，確認(rèn)細(xì)胞純度?。

?電生理記錄?：通過(guò)膜片鉗技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞電特性（如鈉電流）。