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詳解原代細胞凍存的步驟

（1）選擇處于對數生長期的原代細胞，在凍存前一天換液。將多個培養瓶中的細胞培養液去掉，用0.25%胰蛋白酶消化。適時去掉胰蛋白酶，加入少量新培養液。用吸管吸取培養液反復吹打瓶壁上的細胞，使其成為均勻分散的細胞懸液。懸浮細胞則不要消化處理。然后將細胞收集于離心管中離心(1000r/min，10分鐘)。（2）去上清液，加入含20%小牛血清的*培養基，于4℃預冷15分鐘后，逐滴加入已無菌的DMSO或甘油，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，細胞濃度為5×106～1×107/mL之間。（凍存培...

胰酶不能去除對原代細胞影響的原因

原代細胞消化時，如果消化液中只有胰酶，不含EDTA，不去除是沒有問題的。如果消化液中含有胰酶和EDTA，去除。EDTA是一種化學螯合劑，主要作用在于能螯合Ca、Mg離子，使細胞分離。但EDTA不能被血清中和，消化后要*清洗去除，否則細胞易脫壁。胰酶胰酶和EDTA聯合使用可提高消化效率，所以常二者合用。胰酶的保存胰酶可在-20℃下保存一年。隨著時間延長，胰酶的消化能力減弱。胰酶可分裝凍存，在使用前從-20℃冰箱取出。盡量避免在4℃長期保存。商品化胰酶溶液需要用干冰運輸，在運輸過...

腫瘤細胞在藥物心臟毒性篩選中的應用

腫瘤細胞和誘導型人多能干細胞誘導分化的心肌細胞相似,具有相同的形態結構,且隨著培養時間的推移,功能性K+、Na+、Ca2+通道密度逐漸增加、心肌特異性基因ANF、α-MHC、MLC-2a的表達量增加,具有相似的動作電位時程和收縮性等特點,相當于幼稚型心肌細胞。將它們應用于已知作用藥物的心臟毒性篩選,檢測心肌細胞離子通道、動作電位、心臟損傷標志物、收縮功能的變化,獲得與臨床相似的結果。因此,建立人胚胎干細胞和誘導型人多能干細胞誘導分化心肌細胞的體外評價模型,大大減少了藥物的時間...

5-羥色胺可調控造血腫瘤細胞移植

腫瘤細胞是一群能自我更新并分化為各種成熟血細胞的多能干細胞。基于其重建血液系統的能力，造血干細胞移植已成功用于治療白血病等惡性血液疾病。如何體外誘導和擴增足夠數量且有功能的HSPCs，是臨床上惡性血液疾病治療的瓶頸，也是基礎科學研究的難點和熱點之一。其目前尚未成功的根本原因在于人們對HSPCs產生和擴增的調控機制認識仍不全面。因此，應用模式動物深入和系統地研究體內HSPCs產生和擴增過程及其調控機制，將對體外誘導并擴增有功能的HSPCs具有十分重要的指導意義。中國科學院動物研...

原代細胞直接修復細胞促使損傷創面愈合

原代細胞臨床上燒傷常常并發感染、休克、膿毒血癥、MODS(多器官功能障礙綜合征)等嚴重并發癥，具有很高的病死率。但是，目前臨床上常用的清創換藥、抗感染、補液、生長因子促進愈合、自身或者異體移植等治療方法卻不能取得*理想可靠的效果，而臍帶間充質干細胞展現出的強大修復能力,為燒傷治療開辟了嶄新的路徑。臍帶間充質干細胞是從人臍帶華通膠中分離出來的一種基質細胞，其具有增殖率高、易于分離、便于檢測、不違背倫理道德和無免疫原性或低免疫原性，植入體內有良好的組織相容性，無明顯排斥反應，生物...

細胞株分化過渡狀態

研究人員利用細胞株分析技術發現Lgr5+小腸干細胞來源的祖細胞實際上包含了兩個不同的細胞群體，進一步揭示了小腸干細胞分化過程的zui早期步驟。位于每個小腸腸窩底部的LGR5+小腸干細胞是維持干細胞和小腸上皮細胞自我更新的動力，之前有研究發現干細胞在分化形成具有成熟功能的終末細胞之前會經歷短暫擴充祖細胞（transit-amplifyingprogenitors）階段，這些小腸雙潛能祖細胞會單向分化形成具有吸收功能的細胞或具有分泌功能的細胞。之前還有研究發現在血液中造血祖細胞會...

原代細胞培養中血清為什么不是越多越好

血清是原代細胞培養中用量zui大的天然培養基，含有豐富的細胞生長必須的營養成份，具有極為重要的功能。1.提供對維持細胞指數生長的激素，基礎培養基中沒有或量很少的營養物，以及主要的低分子營養物。2.提供結合蛋白，能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結合或調變它們所結合的物質活力。3.有些情況下結合蛋白質能與有毒金屬和熱原質結合，起到解毒作用。4.是細胞貼壁、鋪展在塑料培養基質上所需因子來源。5.起酸堿度緩沖液作用。6.提供蛋白酶抑制劑，使在原代細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活，...

細胞系轉染樣品的處理步驟

1.細胞系將處理好的蓋玻片放在12孔板底部如果細胞貼壁不牢（如HEK293）或者是半貼壁細胞（如PC12），可以用細胞刮子將鼠尾膠原均勻地涂抹在玻片上包被。也可使用多聚賴氨酸，但是效果不如鼠尾膠原。事實上大部分貼壁的細胞都不用進行包被。如果在操作中發現細胞脫片嚴重，則可考慮進行包被來提高細胞貼壁能力。2.將與培養基混勻后的細胞懸液加入孔中這一步混勻非常重要，如果不勻，一般細胞都會聚集在玻片中央區域，會對形態觀察產生不利影響。分細胞的時候要注意進行形態觀察的時候應該將細胞分得相...