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細胞同步化實驗操作步驟

在腫瘤細胞培養(yǎng)過程中，細胞多處于不同的細胞周期時相中。不同時相的細胞對藥物干預存在不同的反應，會影響實驗的重復性，因此需要制備細胞周期一致的細胞。細胞同步化是解決該問題的好辦法。細胞同步化是利用藥物或其他方法使細胞停止在細胞周期的某個時相的技術(shù)，其基本原則是使細胞停留在細胞周期的特定時相上；停滯過程可以通過調(diào)節(jié)，恢復細胞周期；恢復后所有細胞以一致的步調(diào)在細胞周期中運行。細胞同步化實驗為特定細胞周期轉(zhuǎn)變、細胞動力學、細胞周期調(diào)控以及細胞在不同時相中對藥物的敏感性研究奠定了基礎。...

細胞懸液標本制備實驗步驟

細胞系懸液標本制備實驗步驟(1)取材：收集對數(shù)生長期細胞于離心管中，800～1000r／min離心10min，棄上清，彈指法混勻細胞。沿管壁加入2．0％～2．5％冷戊二醛，輕輕吹打，4℃固定30min。用小鋁片將細清。4℃PBS緩沖液沖洗1～2h或過夜，1000r／min離心5min，棄上清。(2)制備預包埋塊：管內(nèi)加入2％～4％37℃瓊脂糖液0．1～0．5ml，兩手搓離心管，使細胞系與瓊脂糖混勻，室溫冷卻，形成細胞瓊脂凝膠預包埋塊。離心管內(nèi)加適量PBs緩沖液或75％乙醇溶液...

原代細胞培養(yǎng)注意事項

原代細胞培養(yǎng)：1、實驗材料要新鮮，從活體分離材料后要低溫保存，并盡快進行細胞分離實驗。2、無菌操作。操作時用的培養(yǎng)液，可加平時細胞培養(yǎng)液5倍含量的青鏈霉素。3、用酶法分離細胞時，注意酶液的濃度和控制消化時間。貼塊法分離細胞時，注意動作要輕柔，不要傷到細胞組織，組織塊邊緣盡量平整有利于細胞游離。4、培養(yǎng)液的選擇。不同的細胞有對培養(yǎng)液中營養(yǎng)的要求不同，根據(jù)所分離細胞的特性選擇。人支氣管上皮細胞微小RNA英文名稱：HBEpiCmiRNA規(guī)格:1µg2µg5&...

腫瘤細胞凍存保護劑

腫瘤細胞很多化合物都可以作為凍存保護劑，它們既可以單獨使用也可以聯(lián)合使用，例如糖、血清和去污劑。雖然凍存沒有的準則，但是大家普遍認為二甲基亞砜（DMSO）和甘油是保護活細胞和組織使用zui廣泛且zui有效的凍存保護劑。其他凍存保護劑可根據(jù)情況使用，可單獨使用也可聯(lián)合使用，包括：聚乙烯乙二醇（polyethyleneglycol），丙烯乙二醇（propyleneglycol），甘油（glycerine），聚乙烯吡咯烷酮（polyvinylpyrolidone），山梨醇（sorb...

人類外周血淋巴細胞的培養(yǎng)方法

實驗原理染色體是在顯微鏡下可見細胞系有絲分裂過程中出現(xiàn)的結(jié)構(gòu)。因此，必須獲得染色體標本才能進行檢查分析，通常情況下，都是利用外周血淋巴細胞進行核型分析。正常情況下，人體外周血淋巴細胞不再分裂，但植物血凝素（PHA）可刺激血中的淋巴細胞轉(zhuǎn)化成淋巴母細胞，使其恢復增殖能力。因此，可采取少量外周靜脈血，做短期培養(yǎng)，培養(yǎng)至72小時細胞進入增殖旺盛期，此時加入秋水仙素抑制細胞分裂，使細胞分裂停止在中期以獲得足夠量的分裂期細胞，經(jīng)低滲、固定、制片、染色后鏡下觀察進行核型分析。上述制備的染...

細胞長期保存的方法

細胞系長期低溫冰凍必然會導致部分細胞死亡，而且很多時候我們要把細胞樣本拿來重新接種做實驗，所以解凍再凍的過程也會導致細胞死亡。那么起始樣本的細胞濃度就要達到一定的高度，這樣在以后保存的過程中就算死亡一些細胞，我們也還有很多有效細胞可以用，一般來說這個起始細胞密度要達到10的七次方的樣子（單位：細胞/mL）。除了常見抗凍劑甘油外，我們也會添加多糖（polysaccharide）或者葡聚糖（dextran）或某些蛋白質(zhì)用來吸附在細胞表面形成保護薄膜，防止在冷凍過程中對細胞的破壞。...

原代細胞培養(yǎng)過程可能出現(xiàn)的問題及解決辦法

原代細胞培養(yǎng)過程中會出現(xiàn)這樣或那樣的問題，客戶遇到的問題從細胞生長角度來說，針對細胞不貼壁、生長緩慢、生長不好，甚至死亡的原因，我們做以下分析并提出相對應的解決方法。一、培養(yǎng)細胞不貼壁可能原因：●胰蛋白酶消化過度●支原體污染●培養(yǎng)基pH值過堿（NaHCO3分解）●細胞老化●接種細胞起始濃度太低或太高解決方法：●縮短胰蛋白酶消化時間或降低胰蛋白酶濃度●分離培養(yǎng)物，檢測支原體。清潔支架或培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物。●使用無菌醋酸溶液調(diào)整pH值或充入無菌CO2●啟用新的保...

細胞株培養(yǎng)時消毒滅菌的方法

細胞株嚴格的消毒滅菌對保證細胞培養(yǎng)的成功是極為重要的，其方法分為物理法和化學法兩類。前者包括干熱、濕熱、濾過、紫外線及射線等，后者主要指使用化學消毒劑等。①熱滅菌：玻璃器皿，160~170℃，90~120min或180℃45~60min。②蒸氣滅菌：用于玻璃器皿、濾器橡膠塞、解剖用具、耐熱塑料器具、受熱不變性的溶液等，不同物品其有效滅菌壓力和時間不同，如培養(yǎng)用液、橡膠制品、塑料器皿等用68kPa(115℃)高壓滅菌10min;布類、玻璃制品、金屬器械等用103kPa(121....