細(xì)胞簡(jiǎn)介：

產(chǎn)品名稱 人子宮肌瘤組織源細(xì)胞

組織來(lái)源 子宮肌瘤組織

產(chǎn)品規(guī)格 5×10^5Cells/T25

細(xì)胞簡(jiǎn)介 人子宮肌瘤組織源細(xì)胞分離自子宮肌瘤組織；子宮肌瘤是女性生殖器官中常見的一種良性腫瘤，也是人體中常見的腫瘤之一，又稱為纖肌瘤、子宮纖瘤。由于子宮肌瘤主要是由子宮平滑肌細(xì)胞增生而成，其中有少量纖結(jié)締組織作為一種支持組織而存在，故稱為子宮平滑肌瘤較為確切。簡(jiǎn)稱子宮肌瘤。有關(guān)子宮肌瘤的病因迄今仍不十分清楚，可能涉及到正常肌層的細(xì)胞突變、性及局部生長(zhǎng)因子間的較為復(fù)雜的相互作用。根據(jù)大量臨床觀察和實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明子宮肌瘤是一種依賴性腫瘤。雌是促使肌瘤生長(zhǎng)的主要因素，還有學(xué)者認(rèn)為生長(zhǎng)（GH）與肌瘤生長(zhǎng)亦有關(guān)，GH能協(xié)同雌促進(jìn)有絲分裂而促進(jìn)肌瘤生長(zhǎng)，并推測(cè)人胎盤催乳素（HPL）也能協(xié)同雌促有絲分裂作用，認(rèn)為妊娠期子宮肌瘤生長(zhǎng)加速除與妊娠期高環(huán)境有關(guān)外，可能HPL也參加了作用。此外卵巢功能、代謝均受高級(jí)神經(jīng)中樞的控制調(diào)節(jié)，故神經(jīng)中樞活動(dòng)對(duì)肌瘤的發(fā)病也可能起重要作用。因子宮肌瘤多見于育齡、喪偶及生活不協(xié)調(diào)的婦女。長(zhǎng)期生活失調(diào)而引起盆腔慢性充血也可能是誘發(fā)子宮肌瘤的原因之一。總之，子宮肌瘤的發(fā)生發(fā)展可能是多因素共同作用的結(jié)果。子宮肌瘤通常含有過(guò)多的細(xì)胞外介質(zhì)，其中主要含有成纖細(xì)胞及其產(chǎn)生的膠原蛋白I型和III型等，肌瘤細(xì)胞與成纖細(xì)胞以及各種生長(zhǎng)因子發(fā)生相互作用，為肌瘤形成和生長(zhǎng)提供了適宜的微環(huán)境。目前分子生物學(xué)研究認(rèn)為，子宮肌瘤是由單克隆平滑肌細(xì)胞增殖而成，多發(fā)性子宮肌瘤是由不同克隆細(xì)胞形成的。是否上述所述因素在不同克隆形成中起到不同的作用尚不清楚。

方法簡(jiǎn)介 實(shí)驗(yàn)室分離的癌組織源細(xì)胞采用膠原酶消化、經(jīng)Percoll離心純化制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10? cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)室分離的人子宮肌瘤組織源細(xì)胞經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

產(chǎn)品信息：

培養(yǎng)信息：

自備試劑： 0.25% 、PBS 、培養(yǎng)基

培養(yǎng)基： 人子宮肌瘤組織源細(xì)胞培養(yǎng)基(含F(xiàn)BS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性： 貼壁

細(xì)胞形態(tài)： 梭形、多角形

傳代比例： 1:2

傳代特性： 可傳3-5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液： 0.25%

凍存步驟：

凍存前準(zhǔn)備?

確保細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，密度達(dá)80%-90%?。

配制凍存液：推薦50%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+10%DMSO?。

?細(xì)胞處理?

棄去培養(yǎng)上清，用PBS潤(rùn)洗1-2次?。

加入消化后，用含血清的培養(yǎng)基終止消化。

?凍存操作?

離心（1000RPM，3-4分鐘）后棄上清，用凍存液重懸細(xì)胞?。

分裝至凍存管（每管1mL，細(xì)胞數(shù)100-400萬(wàn)）?。

4℃靜置10分鐘，-20℃ 2小時(shí)，-80℃過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮?。

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操作實(shí)驗(yàn)步驟：

1. 原代細(xì)胞分離

?組織獲取?：采用成年SD大鼠，快速取出海馬或脊髓組織，置于低溫人工腦脊液（0-4℃）中保存?。

?消化與離心?：使用木瓜蛋白酶消化組織，通過(guò)Optiprep不連續(xù)梯度離心，收集組織細(xì)胞密集帶?。

?細(xì)胞培養(yǎng)?：將細(xì)胞懸液接種于含B27添加劑和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子2（FGF-2）的培養(yǎng)基中，置于37℃、5% CO2孵箱中培養(yǎng)?。

2. 細(xì)胞純化

?差速貼壁法?：通過(guò)搖床分離（200r/min去除小膠質(zhì)細(xì)胞，280r/min收集少突前體細(xì)胞）?。

?免疫磁珠分選?：利用NG2抗體標(biāo)記后通過(guò)磁珠分選，提高純度?。

3. 細(xì)胞傳代與凍存

?傳代?：使用含EDTA和DNase I的消化液處理細(xì)胞，按1:3比例傳代?。

?凍存?：將細(xì)胞重懸于凍存液（含10% DMSO和90%胎牛血清），程序降溫后保存于液氮中?。

4. 功能驗(yàn)證

?免疫熒光染色?：檢測(cè)NG2、GFAP等標(biāo)志物表達(dá)，確認(rèn)細(xì)胞純度?。

?電生理記錄?：通過(guò)膜片鉗技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞電特性（如鈉電流）。