商品屬性：

產品信息：

產品名稱 人椎間盤纖環細胞

組織來源 椎間盤組織

產品規格 5×10^5Cells/T25

細胞簡介 人椎間盤纖環細胞分離自椎間盤組織；椎間盤是位于脊柱兩椎體之間，由軟骨板、纖環、髓核組成的一個密封體。上下有軟骨板，是透明軟骨復蓋于椎體上，下面骺環中間的骨面。上下的軟骨板與纖環一起將髓核密封起來。纖環由膠原纖束的纖軟骨構成，位于髓核的四周。纖環的纖束相互斜行交叉重疊，使纖環成為堅實的組織，能承受較大的彎曲和扭轉負荷。纖環的前側及兩側較厚，而后側較薄。纖環的前部有強大的前縱韌帶，后側的后縱韌帶較窄、較薄。纖環細胞密度為9000個細胞/mm3，其外層的細胞呈梭型，主要屬于纖細胞，內層細胞呈圓形，主要屬于軟骨細胞。在培養的情況下，用透射電鏡觀察則有許多共同的超微結構表現，它們的核較圓，核仁較明顯。細胞質內可見大量的附有核糖體顆粒的粗面內質網和滑面內質網。細胞質內線粒體多，為橢圓形，有的可看到雙層單位膜，由單位膜包繞初級深酶體和次級深酶體。細胞質內有一系列的扁平囊及小泡主成的高爾基復合體和分泌顆粒，纖環細胞合成分泌蛋白多糖及膠原纖的能力很旺盛，保證纖環生理代謝活動所需的構造物質的供給。一但這種供給減少，纖環的生物性能就會減弱，椎間盤開始退變。

方法簡介 實驗室分離的人椎間盤纖環細胞采用膠原酶-聯合消化法并結合軟骨細胞專用培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×10? cells/瓶。

質量檢測 實驗室分離的人椎間盤纖環細胞經Ⅰ型膠原蛋白免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養信息：

自備試劑： 0.25% 、PBS 、培養基

培養基： 人椎間盤纖環細胞培養基(含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液一次

生長特性： 貼壁

細胞形態： 梭形、多角形

傳代比例： 1:2

傳代特性： 可傳5代左右；3代以內狀態佳

消化液： 0.25%

原代細胞培養步驟：

取材與預處理?：取新生24小時內Wistar大鼠，麻醉后無菌取出肺組織，PBS沖洗去除血管和氣管?。

?消化?：剪碎肺組織，依次用0.2%膠原酶（37℃震蕩1h）和0.5%酶（消化30min）消化，終止后過濾?。

?純化?：采用IgG吸附法去除未貼壁細胞，離心后重懸接種?。

?培養?：使用含10%胎牛血清的DMEM培養基，37℃、5% CO?培養，24小時后換液?。

培養方法?：

原代細胞培養?

?材料?：新生大鼠肺組織、0.2%膠原酶、0.5%酶、DMEM培養基（含10%胎牛血清）。

?步驟?：

取出肺組織，PBS沖洗去除血管和氣管，剪碎。

依次用膠原酶（37℃震蕩1h）和酶（消化30min）消化，終止后過濾。

通過IgG吸附法去除未貼壁細胞，離心后接種于培養皿。

37℃、5% CO?培養，24小時后換液。

?注意事項?：消化時間需嚴格控制（胎鼠25分鐘，新生鼠40-60分鐘），避免過度消化導致細胞死亡。

?細胞系培養?

?傳代?：0.25%消化1-2分鐘，加入含血清培養基終止，按1:2-1:4比例傳代。

?條件?：DMEM+10%胎牛血清，每周換液2-3次，37℃、5% CO?培養。

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