商品屬性：

產品信息：

產品名稱 人源NK細胞（抗體分選/陰選）

組織來源 外周血

產品規格 1×10^6Cells/Vial

細胞簡介 人源NK細胞分離自人外周血單個核細胞；NK細胞即自然殺傷細胞（natural killer cell, NK）是機體重要的免疫細胞，不僅與抗腫瘤、 抗病毒感染和免疫調節有關，而且在某些情況下參與超敏反應和自身免疫性疾病的發生，能夠識別靶細胞、殺傷介質。NK細胞來源于骨髓淋巴樣干細胞，其分化、發育依賴于骨髓及胸腺微環境，主要分布于骨髓、外周血、肝、脾、肺和淋巴結。NK細胞不同于T、B細胞，是一類無需預先致敏就能非特異性殺傷腫瘤細胞和病毒感染細胞的淋巴細胞。由于NK細胞的殺傷活性無MHC限制，不依賴抗體，因此稱為自然殺傷活性。NK細胞胞漿豐富，含有較大的嗜天青顆粒，顆粒的含量與NK細胞的殺傷活性呈正相關。NK細胞作用于靶細胞后殺傷作用出現早，在體外1小時、體內4小時即可見到殺傷效應。NK細胞的靶細胞主要有某些腫瘤細胞（包括部分細胞系）、病毒感染細胞、某些自身組織細胞（如血細胞）、寄生蟲等，因此NK細胞是機體抗腫瘤、抗感染的重要免疫因素，也參與第Ⅱ型超敏反應和移植物抗宿主反應。人源NK細胞的核心標志物是CD3陰性（排除T細胞污染）且CD56陽性；而CD19<5%、CD14<5%作為輔助排除B細胞、單核細胞污染，確保細胞群體單一性。從人體（血液/骨髓等）中直接分選的NK細胞，處于未激活狀態，此時細胞基本不具備體外增殖擴增能力，殺傷能力較弱；體外經過多種抗體、細胞因子分時段進行激活刺激后，可轉入激活狀態，激活的NK細胞體外具備增殖擴增能力，具備體外殺傷能力。本產品人源NK細胞（抗體分選/陰選）為未激活狀態。

方法簡介 實驗室分離的人源NK細胞采用取外周血、密度梯度離心結合抗體分選法制備而來，細胞總數約1.25×10? cells/支，其中活細胞量>1×10? cells/支，細胞活率不低于80%。

質量檢測 實驗室分離的人源NK細胞經CD3-CD56+免疫熒光鑒定，純度可達80%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養信息：

自備試劑： 完培

培養基： 人源NK細胞（抗體分選/陰選） 培養基(含生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等)

換液頻率： 每2-3天換液一次

生長特性： 懸浮

細胞形態： 圓形、類圓形

傳代比例： 不傳代

傳代特性： 未激活，不可傳代

消化液： 無

人源NK細胞（抗體分選/陰選）體外培養周期有限；建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養，以此保證該細胞的佳培養狀態。

原代細胞培養步驟：

取材與預處理?：取新生24小時內Wistar大鼠，麻醉后無菌取出肺組織，PBS沖洗去除血管和氣管?。

?消化?：剪碎肺組織，依次用0.2%膠原酶（37℃震蕩1h）和0.5%酶（消化30min）消化，終止后過濾?。

?純化?：采用IgG吸附法去除未貼壁細胞，離心后重懸接種?。

?培養?：使用含10%胎牛血清的DMEM培養基，37℃、5% CO?培養，24小時后換液?。

培養方法?：

原代細胞培養?

?材料?：新生大鼠肺組織、0.2%膠原酶、0.5%酶、DMEM培養基（含10%胎牛血清）。

?步驟?：

取出肺組織，PBS沖洗去除血管和氣管，剪碎。

依次用膠原酶（37℃震蕩1h）和酶（消化30min）消化，終止后過濾。

通過IgG吸附法去除未貼壁細胞，離心后接種于培養皿。

37℃、5% CO?培養，24小時后換液。

?注意事項?：消化時間需嚴格控制（胎鼠25分鐘，新生鼠40-60分鐘），避免過度消化導致細胞死亡。

?細胞系培養?

?傳代?：0.25%消化1-2分鐘，加入含血清培養基終止，按1:2-1:4比例傳代。

?條件?：DMEM+10%胎牛血清，每周換液2-3次，37℃、5% CO?培養。

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