實驗過程：

一、巴西諾卡菌探針法熒光定量PCR試劑盒試劑準備

1.DNA模板

2.產(chǎn)品僅用于科研對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）

3.10×PCR Buffer

4.2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM

5.Taq酶

二、操作步驟

1.在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。

10×PCR buffer： 5μl

dNTP mixl：4μl

引物1（10pM）：2μl

引物2（10PM）：2μl

Taq酶（2U/μl）：1μl

DNA模板（50ng-1μg/μl）：1 μl

加ddH2O至：50μl

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2.調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃保溫7min。

3.結束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4.PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：巴西諾卡菌探針法熒光定量PCR試劑盒

英文名稱：Nocardia brasiliensis

產(chǎn)品規(guī)格：50T

產(chǎn)品運輸：低溫運輸

產(chǎn)品保存：-20℃保存

產(chǎn)品有效期：一年

產(chǎn)品特點：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量PCR產(chǎn)品

運輸及保存：

低溫運輸，-20℃保存，保存期限一年。

自備試劑

DNA模板、10×ROX（根據(jù)機型決定，具體見使用方法）。

本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。


產(chǎn)品及特點：

1. 即開即用，用戶只需要提供病毒樣品。

2. 根據(jù)鮑皰疹樣病毒探針法熒光定量保守序列設計的專一性引物，與相關病毒無交叉反應。

3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。

4. 一管式熒光定量PCR檢測，避免后續(xù)污染。

5. 本試劑盒足夠50次20μL反應體系的熒光定量PCR。

以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

二甲四(標準品) 質(zhì)量規(guī)格：分析標準品 MCPA

MBP(Myelin Basic Protein, MBP)peptide  髓鞘堿性蛋白(多肽抗原)現(xiàn)貨供應可溶性瘦素受體檢測試盒1gHuman/人Elisa試盒4903360

阿曼托黃6HEX 亞酰5mg

油甲酯(分析標準品,>99.0%(GC)) 質(zhì)量規(guī)格：分析標準品,>99.0%(GC) Methyl oleate

NPY ( Neuropeptide Y)136  神經(jīng)肽 Y（136多肽）進口、分裝愛潑斯坦爾病潛伏膜蛋白2A檢測試盒5gHuman/人Elisa試盒4906245

鹽去駱駝蓬堿 CAS號： 343271 規(guī)格： HPLC≥98%; 20mg 訂購|咨詢

右旋四巴馬汀 CAS號： 3520147 規(guī)格： HPLC≥98%; 20mg 訂購|咨詢

原百部次堿 CAS號： 169534854 規(guī)格： HPLC≥98%;10mg 訂購|咨詢

原百部堿 CAS號： 27495405 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

雅姆皂苷元 CAS號： 512061 規(guī)格： HPLC≥98%;10mg 訂購|咨詢

3南美楝屬二 CAS號： 35833626 規(guī)格： HPLC≥98%;10mg 訂購|咨詢

酰二美味草素A CAS號： 94285220 規(guī)格： HPLC≥98%;10mg 訂購|咨詢

羽扇 CAS號： 1617705 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

葉綠 CAS號： 150867 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

鹽堿 CAS號： 3738703 規(guī)格： HPLC≥98%;10mg 訂購|咨詢

異甜菊 CAS號： 27975195 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

野鷲尾苷 CAS號： 491747 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

3酰11乳香 CAS號：  規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

3酰乳香 CAS號：  規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

使用方法：
一、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DN段作為陽性對照。
2. 標記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45μL熒光PCR模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在7號管中加入5μL 1×10E8拷貝/μL的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在6號管中加入5μL 1×10E7拷貝/μL的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭，在5號管中加入5μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個樣品，必須設置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）。可以用10μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4拷貝/μL，10μL相當于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒提取試劑盒兼容。
三、設置qPCR反應（20μL體系，在樣品制備室進行）
10. 如果只做1次重復，則標記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照，6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復，則反應設置數(shù)量相應增加2或3倍。
11. 在標記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好。