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當前位置:首頁產品中心天然蛋白、重組蛋白重組蛋白/RP蛋白二硫化物異構酶A4(PDIA4)重組蛋白

蛋白二硫化物異構酶A4(PDIA4)重組蛋白
產品簡介

蛋白二硫化物異構酶A4(PDIA4)重組蛋白公司正在出售的產品:棘球絳蟲通用探針法熒光定量PCR試劑盒鵪鶉奇異線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒巨細胞病毒探針法熒光定量PCR試劑盒鮰愛德華氏菌探針法熒光定量PCR試劑盒擠奶工結節(jié)病毒PCR檢測試劑盒Milker's Nodule Virus(MNV)PCR多態(tài)小小菌PCR檢測試劑盒Mima polymorphaPCR水貂病毒性腸炎病毒PCR檢測試劑盒M

更新時間:2023-03-22
廠商性質:經銷商
訪問量:367
產品型號:
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公司產品僅供科研實驗產品屬性:

特點:

標記:標記反應簡單、溫和且很少抑制抗體活性,將與抗體共價結合是一種非常簡便、直接的標記方法。

酶標記:酶標記抗體是將酶與特異性抗體經適當方法連接而成,其應用范圍非常廣泛,結果即時可見、敏感性高。

熒光標記:熒光基團AbFluorTM是新型的熒光標記物之一,產品覆蓋350-770nm。不同的AbFluor基團經恰當?shù)募す饪砂l(fā)光, 從而得知抗體的定位和待測抗原的分布情況,主要用于細胞分選或高分辨率免疫染色,是一種非常好的亞細胞水平定位的方法。

產品名稱:蛋白二硫化物異構酶A4(PDIA4)重組蛋白   

物種:Homo sapiens (Human,人)

英文名稱:Recombinant Protein Disulfide Isomerase A4 (PDIA4)

PDI-A4; ERP70; ERP72; Protein Disulfide Isomerase-Associated 4; Endoplasmic reticulum resident protein 70

酶與激酶

物種:Homo sapiens (Human,人)

來源:原核表達

宿主E.coli

內毒素水平:<1.0EU/μg(LAL法測定)

亞細胞定位::內質網腔

預測分子量:17.3KDa

實際分子量:17kDa(差異分析請參閱說明書)

片段與標簽:Phe505~Thr636 with N-terminal His Tag

緩沖液成份:磷酸鹽緩沖液(pH7.4,含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.)

性狀:凍干粉

純度:> 97%

等電點:9.4

應用:Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.

規(guī)格10μg50μg200μg1mg5mg

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圖片6.png


標簽選擇:

親和標簽:蛋白重組表達過程中采用親和標簽融合表達有兩方面的作用:一方面是為了使蛋白純化過程變得更加容易;另一方面是為了促進某些不溶性蛋白可溶。蛋白標簽可分兩類:一類是短肽類標簽;一類是長肽以融合蛋白(fused partner)形式共表達。使用不同的蛋白標簽需要根據(jù)具體案例來分析。

不同的系統(tǒng)步驟稍微有些不同的,大致步驟如下:

真核表達系統(tǒng)的重組蛋白表達步驟:

a.      選擇表達載體和宿主細胞(常用的CHO和HEK293)

b.      表達載體的構建

c.      無內毒素的質粒抽提

d.      細胞瞬時轉染

e.      表達小試,條件優(yōu)化

f.       表達分析和鑒定(SDS-PGAE和WB)

g.      大量表達

h.      親和純化

i.        檢測和鑒定

原核表達系統(tǒng)的重組蛋白表達步驟:

a.      選擇表達載體

b.      密碼子優(yōu)化

c.      基因合成/亞克隆

d.      轉化表達菌株

e.      蛋白表達小試分析

f.       如果蛋白可溶,蛋白親和純化

g.      如果蛋白不可溶,則需要變復性來制備可溶蛋白。

h.      鑒定,包括SDS-PAGE和WB鑒定

GZMH蛋白;表達蛋白的分析、純化、檢測

  誘導表達成功后,表達蛋白的分析、純化、檢測應該順當,按一般的實驗步驟做沒太大的問題。

操作步驟

根據(jù)使用量,取每 1mL RIPA 加入 10uL PMSF,使 PMSF 的zui終濃度為 1mM。混勻備用(PMSF 現(xiàn)用現(xiàn)加)。

1、樣品前處理:

a)對于貼壁細胞:去除培養(yǎng)液,用 PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。按照 6 孔板每孔細胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細胞充分接觸。

b)對于懸浮細胞:離心收集細胞,用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞量加入150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液,再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多,必需分裝成 50-100 萬細胞/管,然后再裂解。

c)對于組織樣品: 把切成細小的碎片。按照每 20mg 組織加入 150-250 uL 裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當減少裂解液的用量)。用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。

2、后處理:

將裂解后的樣品 10000-14000g 離心 3-5 分鐘,取上清,即可進行后續(xù)的蛋白濃度測定、SDS-PAGE、Western blotting 和免疫沉淀等操作

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