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產(chǎn)品名稱：吡咯啉-5-羧酸合成酶（P5CS）測(cè)試盒說明書

規(guī)格 : 50管/24樣、100管/48樣

測(cè)試方法:微量法、可見分光光度法

貨號(hào)：YS-01S6423

測(cè)定意義

脯氨酸是植物體內(nèi)適應(yīng)逆境脅迫的一種重要的滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)。高等植物中脯氨酸代謝因其初始底物不同，分為谷氨酸( Glu) 和鳥氨酸( Orn) 兩條合成途徑。吡咯啉-5-羧酸合成酶（P5CS， Δ1-pyrroline-5-carboxylate synthetase）是以谷氨酸為前體合成脯氨酸途徑的關(guān)鍵酶，對(duì)植物適應(yīng)逆境脅迫起關(guān)鍵作用。

測(cè)定原理：

吡咯啉-5-羧酸合成酶催化谷氨酸生成P5C過程中分解ATP生成ADP和無機(jī)磷，通過鉬酸銨比色法測(cè)定單位時(shí)間內(nèi)產(chǎn)生無機(jī)磷的量可確定P5CS活性。

需自備的儀器和用品：

可見外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

樣品制備：

1）. 直接或稀釋使用清亮無色中性液體樣品，體積可達(dá)2.000ml。

2）. 過濾混濁溶液。

3）. 除去樣品中的CO 2 。

4 ）. 加氫氧化鉀或氫氧化鈉將酸性樣品的PH值調(diào)至8.0。

5 ）. 調(diào)整酸性淺色樣品的PH值至8.0，孵育約15分鐘。

6 ）. 用空白樣品做對(duì)照測(cè)定有色樣品（如有必要調(diào)整PH值至8.0）。

7 ）. 用PVPP（ 聚乙烯吡咯烷酮）或聚酰胺處理深色未經(jīng)稀釋或體積更大的樣品。

8 ）. 壓碎、攪勻固體或半固體樣品，用水溶解提取。

9 ）. 用Carrez試劑將含有蛋白質(zhì)的樣品去蛋白。

10）.含脂肪的樣品用熱水提取。

特點(diǎn):

(1)應(yīng)用廣泛

由于各種各樣的無機(jī)物和有機(jī)物在紫外可見區(qū)都有吸收,因此均可借此法加以測(cè)定。到目前為止,幾乎化學(xué)元素周期表上的所有元素(除少數(shù)放射性元素和惰性元素之外)均可采用此法。

(2)靈敏度高

由于相應(yīng)學(xué)科的發(fā)展,使新的有機(jī)顯色劑的合成和研究取得可喜的進(jìn)展,從而對(duì)元素測(cè)定的靈敏度大大提高了一步。特別是由于多元絡(luò)合物和各種表面活性劑的應(yīng)用研究,使許多元素的摩爾吸光系數(shù)由原來的幾萬提高到幾十萬。相對(duì)于其它痕量分析方法而言,光度法的精密度和準(zhǔn)確度一致*是比較高的。不但在實(shí)際工作中光度法被廣泛采用,在標(biāo)準(zhǔn)參考物質(zhì)的研制中,它更受重視,很多光度分析法已制定成為標(biāo)準(zhǔn)方法。

(3)選擇性好

目前已有些元素只要利用控制適當(dāng)?shù)娘@色條件就可直接進(jìn)行光度法測(cè)定,如鈷、鈾、鎳、銅、銀、鐵等元素的測(cè)定,已有比較滿意的方法了。

(4)準(zhǔn)確度高

對(duì)于一般的分光光度法來說,其濃度測(cè)量的相對(duì)誤差在1-3%范圍內(nèi),如采用示差分光度法測(cè)量,則誤差往往可減少到千分之幾。

(5)適用濃度范圍廣

可從常量(1-50%)(尤其是使用示差法)到痕量(10-6-10-8%)(經(jīng)預(yù)富集后)。

(6)分析成本低、操作簡(jiǎn)便、快速

Anti-TCF7L2/FITC 熒光素標(biāo)記轉(zhuǎn)錄因子7類似物2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Leptin 瘦素(多肽抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

分泌型卷曲相關(guān)蛋白1抗體 anti-SFRP1 0.2ml

Phospho-Syk (Tyr525 + Tyr526) 英文名稱： 磷酸化非受體型酪酸蛋白激酶抗體 0.1ml

E2F7 英文名稱： 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子E2F7抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-MEF2A (Thr312) 磷酸化肌細(xì)胞增強(qiáng)因子2抗體 規(guī)格 0.1ml

Leptin 瘦素(多肽抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

Leptin 瘦素(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

Anti-CD2 CD2抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh PAI-2/SerpinB2 纖溶酶原激活物抑制因子2抗體(血漿酶原激活酶抑制因子-2) 規(guī)格 0.1ml

COQ7 Kit Human 人 COQ7 ELISA配對(duì)抗體 ELISA

Tsg101 英文名稱： 易感基因101蛋白抗體 0.1ml

C6orf150 英文名稱： 6號(hào)染色體開放閱讀框150抗體 0.1ml

Anti-CD2 CD2抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

SRRM2 英文名稱： 絲酸/精酸相關(guān)核基質(zhì)蛋白2抗體 0.1ml

phospho-EGFR (Tyr1016) 英文名稱： 磷酸化表皮生長(zhǎng)因子受體抗體 0.1ml

樣物質(zhì)結(jié)合蛋白/細(xì)胞粘附分子樣蛋白抗體 Anti-OPCML 1ml

Anti-Phospho-SMC1 (Ser360) /FITC 熒光素標(biāo)記磷酸化染色體結(jié)構(gòu)維持蛋白質(zhì)1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-NMDAR2B (Tyr1336) 磷酸化谷氨酸受體2B抗體 規(guī)格 0.1ml

c-erbB-2蛋白 c-erbB-2蛋白(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
吡咯啉-5-羧酸合成酶（P5CS）測(cè)試盒說明書草酸一水(>98%,BC)黃芩素 組蛋白H2A-T120磷酸化檢測(cè)試劑盒

過酸(>99%,BR)秦皮素 組蛋白H2A-T129磷酸化檢測(cè)試劑盒

氫鈉一水(>98%,BR)秦皮甲素 組蛋白H3-T3磷酸化檢測(cè)試劑盒

硫酸鈉十水(>99%,BC)秦皮乙素 組蛋白H3-T11磷酸化檢測(cè)試劑盒

司班40綠原酸 組蛋白H3-T45磷酸化檢測(cè)試劑盒

鹽酸酪新綠原酸 組蛋白H3-S10磷酸化檢測(cè)試劑盒

糠酸(>97%，BR)隱綠原酸 組蛋白H3-S28磷酸化檢測(cè)試劑盒

2-甲基咪唑(>98%,BR)異綠原酸A 組蛋白H3-S31磷酸化檢測(cè)試劑盒
操作步驟:

實(shí)驗(yàn)開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過高時(shí)，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1.        加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.        棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl（在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。

3.        溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

4.        每孔加檢測(cè)溶液B工作液（同檢測(cè)A工作液） 100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。

5.        溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

6.        依序每孔加底物溶液90μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7.       依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。