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禽流感病毒H5N1亞型核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)實驗原理

更新時間:2020-04-16點擊次數:575

禽流感病毒H5N1亞型(AIV-H5N1)核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)實驗原理:
多聚酶鏈式反應(polymerase chain reaction, PCR)基本原理類似于DNA的天然復制過程,其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR由變性、退火、延伸三個基本反應步驟構成。
1. 模板DNA的變性:模板DNA經加熱至93℃左右一定時間后,使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,以便它與引物結合,為下輪反應作準備;
2. 模板DNA與引物的退火(復性):模板DNA經加熱變性成單鏈后,溫度降至55℃左右,引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結合;
3. 引物的延伸:DNA模板-引物結合物在Taq DNA聚合酶的作用下,以dNTP為反應原料,靶序列為模板,按堿基配對與半保留復制原理,合成一條新的與模板DNA 鏈互補的半保留復制鏈重復循環變性、退火、延伸三過程,就可獲得更多的“半保留復制鏈”,而且這種新鏈又可成為下次循環的模板。每完成一個循環需2~4分鐘, 2~3小時就能將待擴增的目的基因擴增放大幾百萬倍。

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